Родители Мистер, Конни и Дуг Мистер, входили в группу, которая занималась контрабандой марихуаны из Ямайки в США. Они оба были арестованы за участие в контрабандной деятельности. До начала суда они были освобождены под залог, в это время Конни забеременела. Позже она была осуждена на 10 лет в тюрьме штата Техас, где провела бо́льшую часть беременности[6]. Лейтон родилась в больнице Техаса, куда её мать была доставлена во время схваток. Через три месяца после родов мать вернулась в тюрьму, чтобы продолжить отбывать свой срок. Пробыв в тюрьме 16 месяцев, она была досрочно освобождена и стала жить вместе с дочерью.
«Я родилась не в тюрьме, я родилась в больнице. Я жила со своей матерью в течение нескольких месяцев, после чего я жила со своей бабушкой, пока моя мама не вышла. Но у меня была нормальная жизнь»
— Мистер в интервью для журнала «Teen Vogue»
Когда Лейтон было 11 лет, она переехала со своей тётей в Нью-Йорк и начала работать в качестве модели в «Wilhelmina», затем она работала с фотографом Софией Коппола.
Дебют Мистер на телевидении состоялся в 1999 году, когда она сыграла Алису Тёрнер в телесериале «Закон и порядок». После этого были эпизодические роли в сериалах «Седьмое небо», «C.S.I.: Место преступления Майами», «24 часа», «8 простых правил для друга моей дочери-подростка» и других. В большом кино дебют Лейтон Мистер состоялся в 2003 году в фильме «Проклятие самоубийцы».
С 2007 года Лейтон снимается в сериале «Сплетница», где играет роль Блэр Уолдорф. Сериал рассказывает о жизни студентов с Верхнего Ист-Сайда.
В 2009 году Лейтон приняла участие в записи сингла группы Cobra Starship «Good Girls Go Bad». Лейтон также записывает свой дебютный альбом в стиле электро-поп, выход которого намечен на начало 2011 года.